簡要說明

YM4271菌株，MATa型，可直接轉(zhuǎn)化質(zhì)粒或與MATα型酵母菌株EGY48、Y187等通過mating操作進行蛋白互作驗證或篩庫試驗。Transformation marker為：trp1，leu2，ura，報告基因為： HIS3?？捎糜诮湍鸽p雜，酵母單雜或異源蛋白表達等試驗。YM4271感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作pGADT7質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率>104 cfu/μg DNA。

操作說明

1、取一支無菌的1.5ml EP管，依次加入預冷的目的質(zhì)粒1-3µg，Carrier DNA 10µl(95-100 度5min 快速冰浴，重復一次)，100µl冰上融化的感受態(tài)細胞，PEG/LiAc 500µl，輕輕翻轉(zhuǎn)混勻6-8次；

2. 30℃水浴30min，每10min輕輕翻轉(zhuǎn)混勻6-8次；

3. 每支加入20µl的二甲基亞砜；（用于提高轉(zhuǎn)化效率,可不做）

4. 42℃水浴15min，每5min輕輕翻轉(zhuǎn)混勻6-8次；

5. 12000rpm瞬時離心棄上清，每支加入1ml的YPDPlus于30℃復蘇1h；（用于提高轉(zhuǎn)化效率，可不做）

6. 12000rpm瞬時離心棄上清，用100µl 0.9%NaCl重懸，涂板，30℃培養(yǎng)48-96h。

注意事項

1、感受態(tài)細胞最好在冰上融化。

2. PEG溶液在低溫環(huán)境下會析出，請于常溫下溶解后使用。